The aim of the project is to develop a new diagnostic system for ultrasensitive detection of selected rare proteins in body fluids with dynamic range up to 8 orders of magnitude. The test is based on binding of the protein under study to a monoclonal antibody (mAb) immoblized together with thiolated DNA oligonucleotides on gold nanoparticles (NP). Next, the complex of the protein bound to NP is anchored to magnetic immunoparticles. Thiolated DNA oligonucleotides are then released and serve as initiating and limiting DNA primers in quantitative real-time PCR. Utility of the method will be verified by detection of rare proteins in body fluids in patients with neuropsychiatric diseases and for detection of rare cytokines. The project will include testing of newly prepared mAb for their performance in nano-PCR. We assume that nano-PCR will be 6-8 orders of magnitude more sensitive than ELISA and will allow development of diagnostic methods of new generations. (en)
Cílem je vyvinout nový diagnostický systém pro ultrasenzitivní detekci vzácných bílkovin v tělních tekutinách s dynamickým rozlišením až 8 řádů. Test je založen na vazbě studované bílkoviny na monoklonální protilátku (mAb) imobilizovanou, společně s thiolovanými DNA oligonukleotidy, na nanopartikule zlata (NP). V následných krocích je komplex studované bílkoviny-NP zachycen a izolován na magnetických imunopartikulích. Thiolované DNA oligonukleotidy jsou uvolněny a slouží jako iniciační a limitující DNA primery v kvantitativní polymerázové řetězcové reakci (PCR) v reálném čase. Využitelnost metody bude ověřována při detekci cytoskeletálních proteinů v tělních tekutinách pacientů s neuropsychiatrickými chorobami a při detekci cytokinů. Součástí projektu bude testování využitelnosti panelu nových mAb metodou nano-PCR. Předpokládáme, že nano-PCR bude o 6-8 řádů citlivější než běžné metody ELISA a umožní vývoj nových ultrasenzitivních diagnostických metod nových generací.
Byl vyvinut rychlý a citlivý test pro detekci imunoreaktivních proteinů v komplexních tělních tekutinách. Klíčovou komponentou testu jsou nanopartikule zlata pokryté protilátkou a DNA, která slouží jako templát pro následnou kvantitativní PCR. (cs)
Rapid and sensitive assay for detection of immunoreactive proteins in complex body fluids was developed. Key component of the assay are gold nanoparticles covered with antibodies and DNA serving as a template for quantitative PCR. (en)