Temporal and spatial separation of assembly of immature capsid particles from their release makes Mason-Pfizer monkey virus (M-PMV), inducing an AIDS like syndrom in non-human primates, an attractive experimental model for the study of retroviral capsid assembly and its maturation. Here we propose to study the 3D structure of the scaffolding protein p12 and the 13 kDa form of M-PMV protease (PR) using isotopicaly aided NMR spectroscopy. The role of the C-terminal extension of PR on its structure and higher proteolytic activity compared to the 3D structure of 12 kDa PR will be determined. We will also investigate the role of PR truncations in the virus life and the liberation of the M-PMV PR from the polyprotein precursors and its activation using tissue culture experiments. Using bacterial and in vitro assembly system we will determine the molecular mechanism and structure/function relations of Gag-derived domains involved in the assembly of retroviral capsid. (en)
Sbalování nezralých virových částic a jejich uvolňování a zrání jsou u Mason-Pfizerova opičího viru časově i prostorově oddělené děje. Díky tomu je tento retrovirus, který způsobuje syndrom podobný AIDS u makaků, vhodným experimentálním modelem pro studium sbalování kapsid a procesu jejich zrání. V tomto projektu navrhujeme studovat trojrozměrnou strukturu 13 kDa formy proteasy (PR) a proteinu p12, který hraje roli při sbalování kapisd pomocí izotopově značené NMR spektrometrie. Důraz bude kladen na určení vlivu C-koncové extense molekuly proteasy na její strukturu a aktivitu. Proto bude stanovena struktura 13 kDa formy a porovnána s další formou vznikající při autokatalytickém štěpení tj. 12 kDa formou PR, jejíž 3D strukturu v současnosti dokončujeme. Zároveň bude sledován vliv zkracování molekuly proteasy na životní cyklus viru a uvolňování proteasy z prekursorů v závislosti na hladině jejich exprese v savčích buňkách.
Byla vyřešena 3D struktura M-PMV proteasy a M-PMV NC dUTPasy pomocí NMR a krystalografie. Určili jsme strukturní motivy M-PMV integrasy důležité pro vazbu inhibitorů. (cs)
We solved the high resolution structure of M-PMV protease and M-PMV NC dUTPase using NMR and crystallography. We identified the structural motifs important for inhibitor binding to M-PMV integrase. (en)