The main objective of the proposed grant is the research of the changes of the nuclear chromatin structure in the human leukemic myeloid cell lines after the treatment with differentiating agents and after gamma-irradiation. Changes of abl, bcr and c-mycgene topology in cell nuclei will be detected. Translocation t(9,22);(q34,q11) which leads to chimeric bcr-abl gene (Philadelphia chromosome)that plays an important role in the pathogenesis of chronic myelogenous leukemia (CML) will be studied. Fluorescence in situ hybridisation (FISH) combined with the image analysis will be used. Changes in the structure of interphase nuclei will be related to the cell cycle profile and to the stages of cell maturation. In the frame of this project, the reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) for c-myc and abl-bcr gene expression will be applied. C-myc protooncogene plays an essential role in the regulation of G1 phase of the cell cycle and is important in the initiation of myeloid diff (en)
Hlavním cílem navrhovaného projektu bude zkoumání změn struktury interfázního jádra u buněk lidských myeloidních leukemických linií po působení diferenciačních agens a záření. Budou detekovány změny v lokalizaci ABL a BCR genů a vzdálenost mezi nimi po působení zmíněných činidel. Bude studována translokace t(9;22) (q34;q11) vedoucí k vytvoření chimerického BCR-ABL genu, který hraje důležitou úlohu v patogenezi chronické myeloidní leukémie. Jde o studium tzv. Philadelphského chromosomu. K řešení navrhovaného projektu bude použita fluorescenční in situ hybridizace kombinovaná s analýzou obrazu. Změny ve struktuře interfázního jádra budou asociovány k fázím buněčného cyklu a ke stupni maturace buněk. V poslední fázi výzkumu bude zavedena metoda reverzně transkripční polymerázové řetězové reakce, bude hodnocena exprese c-MYC protoonkogenu, který hraje důležitou úlohu v regulaci G1 fáze buněčného cyklu a je významný v počáteční fázi myeloidní diferenciace. Změny v expresi c-MYC protoonkogenu budo
Výsledky projektu jsou adekvátně shrnuty v závěrečné kartě a jsou uveřejněny ve 4 článcích v mezinárodních impaktovaných časopisech s poděkováním GA ČR a uvedením čísla grantu a byly předmětem 4 prezentací na mezinárodních konferencích. Splnění cílů proj (cs)