Calcium represents one of the most important intracellular messengers and it plays an important role in the regulation of meiosis in mammalian oocytes. Besides other factors, calcium signalling depends on the status of its intracellular deposits. The object of this project is to detect changes in intracellular calcium deposits during growth and acquisition of meiotic competence in the oocytes of mouse and pig. These changes will be studied both in oocytes and in the somatic cells in the developing follicle. Changes in intracellular calcium deposits will be detected using the combined oxalate - pyroantimonate method and electron microscopy. Changes in the distribution of intracellular calcium deposits will also be studied after liberation of the oocyte from its follicle and culture of oocytes in vitro. (en)
Vápník je důležitým poslem vnitrobuněčných signálů. Tyto signály jsou kromě jiného podmíněny stavem vnitrobuněčných depozit vápníků a sehrávají důležitou roli v průběhu meiozy savčích oocytů. Cílem projektu je s pomocí kombinované oxalát-pyroantimonátovémetody zachytit na úrovni elektronové mikroskopie dynamiku vývoje vnitrobuněčných vápníkových depozit během růstu a získávání meiotické kompetence oocytů myši a prasete, a to jak v samotném oocytu, tak i v somatických buňkách vyvíjejícího se folikulu. Dále budou sledovány změny v distribuci vnitrobuněčných depozit vápníku po izolaci oocytů jejich aspirací z folikulu a během kultivace oocytů in vitro. Výsledné elektronogramy budou objektivně vyhodnoceny počítačovou analýzou obrazu. Jednotlivé fáze růsta zrání oocytů budou hodnoceny ve světelném mikroskopu (fázový kontrast, interferenční kontrast, imunofluorescence).
Projekt charakterizuje distribuci intracelulárních vápníkových depozit v oocytech prasete. Inhibice kalcium-dependentních ATPáz vede k uvolnění vápníkových depozit z mitochondrií a toto vede k výstupu oocytu z meiotického bloku. Bylo rovněž prokázáno, že (cs)