The aim of our project is to study the B lymphocyte development in pigs. Although partial analysis of immunoglobulin (Ig) gene rearrangement during prenatal ontogeny has already been performed and fetal Ig-secreting cells have been characterized, data concerning B lymphopoiesis in pigs are rather incomplete. Based on our experience with studies of immune system ontogeny in pigs we intend to: 1) obtain mouse anti-pig hybridomas producing monoclonal antibodies directed against B cell and B cell precursosurface markers; 2) analyze VDJ rearrangement in cell populations sorted from bone marrow by virtue of their surface phenotype; 3) determine B lymphopoietic activity in primary haematopoietic sites and relative proportions of B cell and B cell precursor subsets during early ontogeny; 4) construct pig/mouse heterohybridomas by fusion of fetal thymus B cells with a murine myeloma line and to permit characterization of the fetal Ig repertoire and 5) use intrauterine immunization to study antigen-driven (en)
Navrhovaný projekt bude řešit otázky spojené s vývojem prasečích B lymfocytů. I když již byla provedena DNA analýza přeskupení genů oblasti VDJ těžkých řetězců imunoglobulinů (Ig) v průběhu prenatální ontogeneze i popsány fetální buňky sekretující Ig, jsou údaje o vývoji B lymfocytů prasat značně neúplné. Na základě našich dlouholetých zkušeností se studiem ontogeneze imunitního systému prasat chceme dosáhnout následujících cílů: 1) Získat hybridomy produkující monoklonální protilátky namířené proti povrchovým znakům B buněk a jejich prekurzorů. 2) Analyzovat VDJ přeskupení DNA u populací buněk kostní dřeně tříděných na základě výbavy povrchových znaků. Takto charakterizujeme vývojová stádia prasečí B lymfopoezy a určíme jejich povrchový fenotyp. 3)Stanovit B lymfopoetickou aktivitu primárních center krvetvorby a zastoupení jednotlivých subpopulací B lymfocytů a jejich prekurzorů v průběhu časné ontogeneze. 4) Fůzí B buněk izolovaných z prasečího fetálního thymu s myší myelomovou linii získat
V průběhu řešení projektu byly získány originální údaje o fenotypu a původu B buněk prasete. Řešitelé jako první určili fetální játra a následně kostní dřeň jako hlavní centra fetální B lymfopoezy. Byla zavedena technika vícebarevné charakterizace prekur (cs)