The aim of the project is to improve and enlarge the applicability of CZE especially its modification EMMA (Electrophoretically Mediated MicroAnalysis) method for the assay and study of enzymes. EMMA utilizes differential electrophoretic mobilities ofenzyme, substrate and product. After the application of an electric field, enzymatic reaction takes place and the resultant reaction product and the unreacted substrate are electrophoretically transported towards detector, where they are individuallydetected. Special attention will be paid on the combination of the EMMA methodology with a partial filling technique. In this set-up the part of the capillary is filled with the buffer best possible for the enzymatic reaction whereas the rest of thecapillary with the background electrolyte optimal for separation of substrate and product. The basic limitation of EMMA method - the necessity to have the electrophoretic conditions compatible with both the separation of substrate(s) and product(s) of (en)
Cílem tohoto projektu je zdokonalit a rozšířit aplikační možnosti kapilární elektroforézy, speciálně její modifikace metody EMMA (Electrophoretically Mediated MicroAnalysis) pro stanovení aktivity a studium enzymů. EMMA využívá různé mobility enzymu,substrátu a produktu a jejich vzájemné reakce uvnitř kapiláry v důsledku aplikovaného elektrického pole. Hlavní pozornost bude přitom zaměřena na možnost kombinace metody EMMA s metodou částečného plnění kapiláry, při které je část kapiláry naplněnapufrem optimálním pro příslušnou enzymovou reakci, zatímco zbytek kapiláry základním elektrolytem optimálním pro separaci substrátů a především produktů příslušné enzymové reakce. Tím by měla být odstraněna hlavní limitace metody EMMA. Uvedená modifikacebude využita pro : stanovení aktivity a studium modelových enzymů, stanovení jejich kinetických parametrů se zaměřením na bisubstrátové enzymové reakce studium parametrů ovlivňujících enzymové reakce jako např. teplota studium inhibicí enzymových reakcí
Cílem tohoto projektu bylo zdokonalit a rozšířit aplikační možnosti kapilární elektroforézy, speciálně její modifikace metody EMMA (Electrophoretically Mediated MicroAnalysis) pro stanovení aktivity a studium enzymů. Hlavní pozornost přitom byla zaměřen (cs)
The aim of the project was to improve and enlarge the applicability of capillary electrophoresis especially its modification EMMA (Electrophoretically Mediated MicroAnalysis) method for the assay and study of enzymes. EMMA utilizes differential electroph (en)