Within this project we will continue our previous research focused on developing electrochemical tools for DNA hybridisation detection. We will jodidy oligonucleotides with various tags (primarily metal complexes), study thein electrochemical behaviour and use them as signalling probes in DNA hybridization. OsO4 complexes will be used as chemical probes for unpaired and mispaired bases in DNA heteroduplexes. This principle will be utilized in a new technique of detection of point mutations in DNA. For our purposes we will optimise conditions for manipulating with DNA duplexes containing mismatches and AP sites and conditions for their electrochemical and/or immunodetection. We will employ double-surface strategy of DNA hybridisation detection, in which the hybridisation occurs on separated surfaře - paramagnetic beads. This format allows a precise tune of conditions both for hybridisation and detection. It is expected that results of this project will be further utilized in novel diagnostic (en)
"V rámci navrhovaného projektu chceme navázat na náš předchozí výzkum elektrochemických nástrojů pro detekci hybridizace DNA. Budeme modifikovat oligonukleotidy různými elektrochemicky aktivními značkami (zejména na bázi kovových komplexů), analyzovat jejich elektrochemické chování a využijeme je jako signální sondy při hybridizaci DNA. Dále se budeme zabývat využitím komplexů Os,L jako chemických sond pro chybně spárované a nespárované baze v heteroduplexech DNA a na tomto principu navrhneme metodu detekce bodových mutací v DNA. Pro naše účely budeme optimalizovat podmínky pro manipulaci s duplexy obsahujícími chybné páry a abazická místa a podmínky elektrochemické nebo imunochemické detekce modifikovaných bazí. Při detekci využijeme tzv. dvoupovrchové strategie, kdy proces hybridizace DNA probíhá na samostatném povrchu - paramagnetických kuličkách. Toto uspořádání dovoluje precisní ""vyladění"" podmínek jak pro hybridizaci tak pro detekci. Předpokládáme, že získané poznatky budou následně" (cs)