We plan to describe Norway spruce ABI3 homologue gene expression in developing somatic embryos. Embryogenic lines will be transformed with fusion construct carrying GFP (green fuorescent protein) under the control of studied gene promotor. Selected lines wil be used also for elucidation of relation between ABI3 expression and bascisic acid (ABA) levels. Signal role of ABI3 homologue expression will be studied by means of transgenic lines carrying cDNA of studied gene combined with inducible promoter. Control of induced expression in somatic embryo development will be claryfied by maturation of transformed lines on medium with or without exogenously added ABA. ABA is necessar for embryo maturation in non-transformed lines. Further, ABA biosynthesis inhibitors will be added to maturing transgenic lines to reveal the role of de novo ABA synthesis. Experiment will be accompanied by endogenous ABA determination. (en)
Na modelovém systému somatické embryogeneze smrku ztepilého bude popsána exprese smrkového ABI3 (ABSCISIC ACID-INSENSITIVE3) homologního genu v průběhu vývoje somatických embryí. Za tímto účelem budou embryogenní kultury transformovány fúzním konstruktem s GFP (green fluorescent protein) pod kontrolou promotoru studovaného genu. Získané linie budou rovněž využity pro objasnění vztahu mezi expresí ABI3 a hladinou kyseliny abscisové (ABA). Signální úloha ABI3 homologu při indukci maturace somatických embryí bude studována prostřednictvím transgenních linií nesoucích cDNA sledovaného genu pod inducibilním promotorem. Vliv indukované exprese na další vývoj embryogenní kultury bude studován na médiu v a bez přítomnosti exogenně dodávané ABA, která je u netransformované linie pro vývoj embryí nezbytná. Zároveň bude po přidání inhibitorů ABA syntézy posouzena role její de novo syntézy v transformovaných liniích. Pomocí GC-MS bude v průběhu experimentů stanovována endogenní hladina ABA. (cs)