It is believed that potassium transport systems play a role in many physiological processes of yeast cells, including the regulation of intracellular cation content, tolerance to osmolytes (and thus regulation of cellular volume), pH, membrane potential and cell cycle. However, it is not easy to obtain direct experimental evidence about the transporters role in the regulation of membrane potential and intracellular pH. The mail goal of this project is establishing a new method of fluorescence spectroscopy of cellular pH and membrane potential, using the diS-C3(3) fluorescence probe and a fluorescence protein called pHluorin at a new spectrofluorometer ISS PC1. For this purpose we will use our own series of Saccharomyces cerevisiae mutant strains (and perhaps also other yeasts) differing in the expression of various potassium transport systems. (en)
"Předpokládá se, že transportní systémy draselných kationtů se v buňkách kvasinek podílejí na celé řadě fyziologických procesů od regulace vnitrobuněčného obsahu kationtů přes zajištění tolerance k osmoticky aktivním látkám (a tím na regulaci buněčného objemu), regulaci pH a membránového potenciálu, až po průběh buněčného cyklu. Přímé experimentální důkazy pro účast transportních systémů na regulaci membránového potenciálu a vnitrobuněčného pH je však poměrně obtížné získat. Hlavním cílem předkládaného projektu je zavedení metody měření membránového potenciálu pomocí fluorescenční sondy diS-C3(3) a měření vnitrobuněčného pH pomocí fluorescenčního proteinu ""pHluorin"" na spektrofluorimetru ISS PC1 v námi vytvořené sérii mutantních kmenů Saccharomyces cerevisiae (případně dalších kvasinek) lišících se v expresi jednotlivých transportních systémů pro draselné kationty." (cs)
Využití fluorescenčních metod pro stanovení úlohy transportních systémů K+ v regulaci membránového potenciálu a vnitrobuněčného pH kvasinek (cs)
Application of fluorescence methods to estimate the role of potassium transporters in the regulation of membrane potential and intracellular pH of yeast cells (en)