V nedávné době jsme přinesli první důkazy o přítomnosti komplexu exocyst u rostlin (Elias et al. 2003). Tento komplex je známý jako klíčový regulátor cílené exocytosy buněčných váčků u živočichů a hub. Pomocí přístupu in silico jsme předpověděli všech 8 podjednotek komplexu exocyst a objevili nevídanou mnohost podjednotek Exo70 v genomech Arabidopsis a rýže. V rámci tohoto projektu chceme studovat možnou vývojově a tkáňově specifickou expresi vybraných zástupců 8 podrodin Exo70 pomocí promotor::GUS fůzí v transgenních rostlinách Arabidopsis. Použijeme také transientní a stálou expresi Exo70-GFP fůzí ke studiu jejich diferenciální subcelulární lokalizace a její dynamiky během vývoje a buněčného cyklu pomocí konfokální fluorescenční mikroskopie. Interakce isoforem Exo70 s očekávanými i dosud neznámými partnery budeme studovat pomocí 2-hybridního systému v kvasinkách. Budeme také analyzovat fenotypy mutantů Exo70. (cs)
Recently we provided first evidence for the presence of exocyst complex in plants (Elias et al 2003). This complex is known from animals and fungi to be the key regulator of targeted vesicle exocytosis. Using in silico approach we predicted all 8 exocyst subunits and discovered unprecedented multiplicity of plant Exo70 exocyst subunits within Arabidopsis and rice genomes. In this project we will pursue possible developmental- and tissue-specific expression of selected representatives of 8 Exo70 subfamilies using promoter::GUS fusions in trangenic Arabidopsis plants. We will also use transient as well as stable expression of Exo70-GFP fusions to study their different subcellular localization and its dynamics within the development and the cell cycle using confocal fluorescence microscopy. Interactions of Exo70s isoforms with predicted as well as yet unknown proteins will be studied using 2-hybrid system in yeast. Phenotypes of Exo70 mutants will be also analysed. (en)