The objective of the proposal is to get complex information about interaction of different mechanisms of metabolic regulation of cytokinin (CK) levels in plant cells with respect to disruption and subsequent re-establishment of CK homeostasis. CK homeostasis in Arabidospis plants will be disturbed by constitutive or transient overexpression of genes encoding the CK biosynthetic and degradative enzymes, i.e. isopentenyltransferase (AtIPT3) and cytokinin oxidase (CKX), respectively. Using HPLC/MS/MS the effects of overexpression of AtIPT3 and CKX on the dynamics of a broad spectrum of CKs will be determined to detect metabolic responses of plant cells to down- and up-regulation of specific CKs. Overexpression of AtIPT3 and CKX targeted to different cell structures will be used to specify the operation of the regulatory mechanisms at subcellular level. The effects of changes in CK levels on CK/auxin ratio, which is decisive for control of plant development, will be determined. (en)
Hlavním cílem projektu je získání komplexní informace o interakcích metabolických regulací hladin cytokininů (CK) v rostlinných buňkách při přechodném narušení a následném obnovení hormonální homeostáze potřebných pro iniciaci a další progres specifických hormonálně řízených vývojových procesů. Homeostáze CK v rostlinách Arabidopsis bude narušena permanentně či přechodně zvýšenou expresí genů kódujicích klíčové enzymy biosyntézy a degradace CK, tj. isopentenyltransferázu (AtIPT3), resp. cytokininoxidázu (CKX). Pomocí HPLC/MS/MS bude sledován její vliv na dynamiku širokého spektra CK z hlediska jejich konverze na aktivní, zásobní a neaktivní formy a degradační produkty. Působení regulačních mechanizmů na vnitrobuněčné úrovni bude sledováno pomocí zvýšení exprese AtIPT3 a CKX cílených do různých buněčných struktur. Bude stanoven vliv narušení i obnovení CK homeostáze na změny poměru CK k auxinu, který je určující pro hormonální regulaci vývojových procesů u rostlin. (cs)