Bipolarita mitotického vřeténka je zajištěna nukleací polarizovaných mikrotubulů z center pro jejich organizaci jako jsou centrosomy u somatických buněk živočichů a nukleační centra (spindle pole bodies) u hub. U acentriolárních buněk je tvorba bipolárního mitotického vřeténka pravděpodobně zajištěná interakcí chromatinu, mikrotubulů a příslušných molekulárních motorů. Navrhujeme systém, umožňující analyzovat v podmínkách in vitro nukleační a stabilizační efekt jaderného obalu a chromosomů izolovaných z acentriolárních buněk rostlin na mikrotubuly a jejich další organizaci do bipolárních vřeténka. Imunoeliminace gama-tubulinu, některých vybraných molekulárních motorů spolu s imunofluorescenční a imunoelektronovou analýzou distribuce těchtoproteinů umožní objasnit jejich úlohu v tvorbě acenriolárního mitotického vřeténka, naznačenou již našimi předchozími výsledky. (cs)
Centrosomes in animal somatic cells and spindle pole bodies in fungi nucleate a polarized array of microtubules and dictate spindle bipolarity, while chromatin and molecular motors ensure bipolar spendle assembly in acentriolar cells. In vitro microtubule nucleation and motility assays will be established to study organization of microtubules in the vicinity of nuclear envelope or chromosomes and their assembly to bipolar spindle in acentriolar plant cells. Consequences of immunodepletion and biochemical manipulations to microtubule assembly will be analyzed. Our previous data indicate that gama-tubulin is involved in chromosome mediated organization of mitotic spindles. We propose to elucidate ultrastructural distribution of gama-tubulin, tostudy the effect of its immunodepletion and to identify its cytoplasmic complexes. The role of selected molecular motors and cyclin dependent kinase and MAP kinases will be addressed in the same in vitro assays by inhibition with specific drugs. (en)