Description
| - Nové mitochondriální odpřqhující proteiny (všudypřítomný UCP2, svalově specifický UCP3, pro mozek specifické UCP4 a BMCP), indikované v procesech horečky, obesity a adaptivní termogeneze budou studovány: I) jako rekombinantní proteiny a jejich substituční mutanty exprimované v E. coli a kvasinkách, jako chimerické proteiny kombinující různé UCP a jako izolované proteiny z různých tkání, studiemi rekonstitučními, transportními (H+transportu aktivovaného mastnými kyselinami, MK), vazby ligandů a glykosylace, fotoafinním značením za účelem lokalizace vazebného místa MK, aj., II) v izolovaných mitochondriích z cytokiny-stimulovaných jater, svalů, vílého tuku, srdce lymfocytů a mozku, a III) postižením distribuce mRNA u různých tkání a situací pomocí RT-PCR na zařízení LightCycleru a její korelace s množstvím proteinu (stanoveným vlastními protilátkami anti-UCPn) a funkcí. Cílem bude charakterizovat tyto proteiny, přispět k objasnění jejich role při horečce, obezitě termogenezea apoptóze. (cs)
- Novel mitochondrial uncoupling proteins (ubiquitous UCP2, skeletal muscle-specific UCP3, brain specific UCP4 and BMCP) indicated in fever, obesity and adaptive thermogenesis will be studied: i) as recombinant UCPs and their substitution mutants expressed in E. coli and yeast, chimeric proteins combining differenc UCPs, and native proteins isolated from various tissues, by reconstitution studies (H+transport activated by fatty acids), ligand binding and glycosylation studies, and by photoaffinty labeling, ii) in isolated mitochondria from cytokine-stimulated liver and skeletal muscle, whita fat, heart, lymphocytes, and brain, and by iii) mRNA screening in various tissues under various conditions employing Real Time RT-PCR on a LightCycler, and correlation with protein amount (detected by own developed anti-UCPn antibodies) and function. The aim is the basic molecular level characterization of UCPn, their biochemical regulation and role in fever, obezity, thermogenesis and apoptosis. (en)
|