V tomto projektu se zaměříme na objasnění molekulárních detailů průniku adenylát-cyklázového toxinu (CyaA) buněčnou membránou myeloidních fagocytů. Pomocí souboru komplementárních přistupů objasníme vztah mezi strukturou a funkcí CyaA při interakci s integrinovým receptorem CD11b/CD18 a průniku do buněk fagocytů. Identifikujeme glykosylační místa receptoru nezbytná pro vazbu CyaA a visualizujeme a určíme kinetiku vzniku a stechiometrii oligomerních komplexů CyaA v membráně fagocytů. Pozornost budeme věnovat analýze a objasnění významu mobilizace CyaA do lipidických mikrodomén buněčné membrány a charakterizaci procesu endocytosy CyaA. Prostudujeme také mechanismus a význam vakuolizace buněk vyvolané působením CyaA na molekulární úrovni. Konečně, charakterizujeme mechanismus jímž CyaA indukuje apoptózu fagocytů a prověříme zda přitom aktivuje vznik inflamosomu. Tento projekt tak přinese nové základní poznatky o molekulárním mechanismu průniku CyaA do buněk a jeho působení na fagocyty. (cs)
We propose to investigate the mechanistic details of adenylate cyclase toxin (CyaA) penetration across cellular membrane of myeloid phagocytes. Structural requirements for CyaA interaction with the beta-2 integrin receptor CD11b/CD18 and for translocation into cells will be investigated using a comprehensive set of complementary approaches. N-linked glycosylation sites on the receptor involved in CyaA binding will be identified and the CyaA-CD11b/CD18 complex visualized and characterized. Oligomerization of CyaA in phagocyte membrane and the kinetics and role in toxin uptake of CyaA-receptor complexes relocalization into lipid rafts will be assessed. Endocytic pathways taken and subverted by CyaA will be characterized and the mechanism and role of CyaA-induced vacuolization of phagocytes examined. The mechanism of programmed cell death induction by CyaA and its capacity to activate the inflammasome will be assessed to yield new fundamental knowledge on action of this intriguing toxin (en)