The overall goal of the project is to develop the instrumentation and methodology of high sensitive and fast analyses of biologically important molecules. The main effort will be focused on the development of methods for prenatal diagnostics and population screening, based on mutation detection in genomic DNA. Our latest experiments show that the prerequisites of sensitivity and analysis speed enhancements are the application of laser spectroscopy as a detection principle and miniaturization of the separation device. An electrophoretic separation of DNA fragments detected by laser induced fluorescence can be accomplished in short capillaries or on chips without a loss of resolution. Thus, the analysis time of length and conformational polymorphism of DNA can be shortened to several tens of seconds and a sequence read length of 400 nucleotides can be attained in few minutes. The submitted project includes three research areas of analytical instrumentation and methodology: l. Mutation (en)
Cílem tohoto projektu je vyvinout instrumentaci a metodiku vysoce citlivých a rychlých analýz biologicky významných molekul, které indikují některá závažná onemocnění. Hlavní úsilí bude věnováno vývoji metod pro prenatální a třídící diagnostiku, založených na detekci mutací genomové DNA. Naše nedávné zkušenosti ukazují, že základním předpokladem zvýšení citlivosti a rychlosti analýz je implementace laserové spektroskopie jako detekční metody a miniaturizace zařízení pro separaci. Elektroforetickseparace fragmentů DNA detekovaných pomocí laserem indukované fluorescence může být realizována v kapilárách o délce několika centimetrů nebo na čipech bez ztráty rozlišení. Takto lze zkrátit dobu analýzy délkového nebo konformačního polymorfismu DNA na dobu několika výzkumu analytické instrumentace a metodiky: 1. Detekce mutací sekvenováním krátkých úseků genu pro enzym ATPasu. Deficitem tohoto enzymu dochází k závažné dědičné poruše metabolismu mědi, Wilsonově chorobě, která je vysokou frekvencí
Stanovené cíle byly splněny s bohatými publikačními výstupy, o dosažených výsledcích bylo referováno na četných mezinárodních i domácích konferencích. Nad rámec úkolů vytýčených v přihlášce projektu byla věnována pozornost problematice multikapilární pre (cs)