The aim of the project is pharmacogenomic analysis of the severe toxicity development following fluoropyrimidines treatment, focused on catabolic enzymes of their metabolism DPD and DPYS. A clinical utilization of the analysis will be evaluated. Using molecular biology approaches we will perform analysis of a) mutation in DPYD/DPYS b) their expression c) DPYD promoter in population of patients treated by fluoropyrimidines w/wo toxicity. Population frequency of mutations will be performed. Mutations will be studied by DHPLC/sequencing. Novel mutations will be characterized by computer modeling of protein structure. Expression will be quantified by real-time PCR. Promoter sequences will be studied by methylation-specific PCR/sequencing. Statistical analysis of results and their correlation with clinical data allows assessment of: reduction of morbidity and mortality, treatment efficacy in patients w/wo pharmacogenomic analysis and evaluation of inpatient and treatment costs. (en)
Cílem projektu je farmakogenomická analýza vzniku závažné toxicity po aplikaci fluoropyrimidinů, zaměřená na katabolické enzymy jejich metabolismu - dihydropyrimidindehydrogenázu (DPD) a dihydropyrimidinázu (DPYS), a možnosti její klinické aplikace. Pomocí metod molekulární biologie provedeme u pacientů s/bez výskytu závažné toxicity a) mutační analýzy DPYD/DPYS b) analýzu jejich exprese, c) analýzu promotoru DPYD. Určení frekvence mutací bude provedeno na vzorcích neselektované populace Mutační analýza bude provedena kombinací DHPLC/sekvenování. Nové mutace budou studovány pomocí molekulárního modelování. Exprese bude kvantifikována real-time RT-PCR. Promotorové sekvence budou studovány pomocí metyl specifického PCR/sekvenování. Po statistické analýze výsledků bude vyhodnoceno: zkrácení doby hospitalizace, morbidity a mortality, účinnosti terapie u pacientů léčených fluoropyrimidiny s/bez farmakogenomické analýzy předcházející léčbu. (cs)
ANALYSIS OF GENETIC AND EPIGENETIC EVENTS RESPONSIBLE FOR DEVELOPMENT OF SEVERE AND LETHAL TOXICITY FOLLOWING FLUOROPYRIMIDINES TREATMENT IN ONCOLOGY PATIENTS (en)
Analýza genetických a epigenetických faktorů vedoucích k rozvoji projevů závažné až letální toxicity léčby fluoropyrimidiny u onkologických pacientů (cs)