Biochemické modifikace DNA a histonů (zejména metylace a acetylace) patří mezi epigenetické regulační mechanismy, které ovlivňují strukturu chromatinu vzhledem k jeho transkripční aktivitě/inaktivitě. Zmíněné modifikace histonů a DNA fungují často paralelně, ovšem vzájemné vztahy mezi jednotlivými mechanismy epigenetické dědičnosti, např. vztah mezi acetylací histonů versus metylace DNA, nejsou dosud objasněny. V našich experimentech bude studován metylační stav DNA, histonů a acetylační stav histonů na metafázních chromosomech lidských krevních buněk. Dále bude studován vliv hypometylačního a hyperacetylačního činidla na míru metylace/acetylace histonů a DNA. Vliv těchto biochemických modifikací bude rovněž hodnocen s ohledem na strukturu chromatinu vyššího řádu krevních buněk. Fluorescenční in situ hybridizace a imunofluorescenční metody v kombinaci s cytometrií s vysokým rozlišením umožní vizualizaci vybraných metafázních chromosomů vzhledem k jejich obsahu CpG ostrůvků. V nepřímém (cs)
Biochemical modifications of DNA and histones (especially methylation and acetylation) belong to mechanisms of epigenetic regulation which influence chromatin structure with regards to its transcriptional activity/inactivity. Modifications of histones and DNA exist on parallel pathway, however the mutual relationship between individual epigenetic heredity mechanisms are not yet clear. In our experiments the acetylation status of histones on metaphase chromosomes of humid blood cells and methylation status of DNA and histones and will be studied. The effect of hypomethylation and hyperacetylation drugs on the level of methylation/acetylation status of histones and DNA will also be studied. The effect of these biochemical modifications will be evaluated with regards to the higher-order chromatin structure of blood cells. The selected metaphase chromosomes according to the content of CpG islands will be visualised using fluorescence in situ hybridization and indirect immunofluorescence method (en)