Crosslinking of the high affinity receptor for IgE (FceRI) on the surface of mast cells and basophils initiates a series of biochemical events culminating in degranulation and release of mediators of allergic reactions. Early events include tyrosine phosphorylation of numerous signaling molecules, including kinases of the Src and Syk/Zap families, and rapid (within 1 min) changes in cell morphology. The link between aggregation of FceRI and changes in cell morphology remains enigmetic. In this proposal we will use rat basophilic leukemia (RBL) cells and isolated mast cells to determine physical and functional association of kinases with cytoskeletal components, mainly tubulins. Immunoblotting and immunoprecipitation techniques with monoclonal antibodies specific for the proteins under study will be used to determine kinases-cytoskeleton interactions. Electroporation of phosphorylated oligopeptides will be employed to determine these interactions under in vivo conditions. (en)
Agregace receptorů s vysokou afinitou pro IgE (FceRI) na povrchu žírných buněk a basofilů zahajuje serii biochemických dějů vedoucích k degranulaci a uvolnění mediátorů alergických reakcí. Mezi časné děje patří tyrosinová fosforylace řady signálních molekul, které zahrnují kinásy Src (p56/p53lyn and pp60c-src) a Syk/Zap rodiny, a rychlé změny (v průběhu 1 min) v buněčné morfologii. Vztah mezi agregací FceRI a změnami v morfologii buněk zůstává neobjasněn. V této grantové aplikaci použijeme buňky basofilní leukemia potkana (RBL) a izolované žírné buňky pro objasnění fyzikální a funkční asociace kináz s komponentami cytoskeletu v průběhu buněčné aktivace. Imunoblotovací a imunoprecipitační techniy s využitím monoklonálních protilátek proti studovaným proteinům budou použity jako nástroje pro analýzy těchto asociací. Elektroporace fosforylovaných aligopeptidů do RBL buněk přispěje k určení zda k funkčním interakcím kináz a cytoskeletu dochází v podmínkách in vivo. (cs)