Activation of Lyn and Syk protein tyrosine kinases (PTK) is one of the first signaling events following an aggregation of the high-affinity IgE receptor (FceRI) However, the evidence for their function is largely based od biochemical fractionation and only little is known about their spatial dynamics in living cells. This proposal stems from our recent data suggesting an interaction of Syk PTK with Thy-1 membrane subdomains. Our efferts will be focused on a detailed analysis of spatial dynamics of Syk(using the newly developed Semliki Forest virus (SFV) expression system and green fluorescence protein (GFP) chimeras.). Thy-1 mediated activation of SFV-infected cells, expressing wild-type Syk-GFP will be analyzed at a single-cell level using confocallaser scanning microscopy. The Thy-1-activability of cells carrying Syk mutants with different membrane subdomain localization will also be analyzed to bring out new data on properties of Thy-1 membrane microdomains. (en)
Aktivace protein-tyrozin kináz (PTK) Lyn a Syk je prvním popsaným biochemickým krokem po agregaci receptoru s vysokou afinitou pro IgE (FceRI). Doklady o funkci těchto PTK v buněčné aktivaci byly získány při biochem. analýze buněčných populací, jen málo je však známo o jejich prostorové lokalizaci a dynamice na úrovni jedné buňky. Navrhovaný projekt vychází z našich nedávných nálezů interakce Syk PTK s Thy-1 membránovými subdoménami. V této práci se zaměříme na detailní analýzu prostorové dynamiky Syk kinázy s využitím nového expresního systému na bazi Semliki Forest viru (SFV) a chimér se zeleným fluorescenčním proteinem (GFP). Agregace Thy-1 glycoproteinu u buněk infikovaných SFV-Syk-GFP bude analyzována s využitím konfokální mikroskopie. Aktivatelnost buněk se Syk kinázou, vykazující rozdíly v lokalizaci v membránových subdoménách, bude rovněž analyzována s cílem získat nové poznatky o vlastnostech a úloze Thy-1 membránových subdomén u žírných buněk. (cs)