Hlavním cílem tohoto projektu je studium strukturní podstaty regulace funkce RGS3 proteinu. 14-3-3 proteiny jsou regulační molekuly, které specificky váží fosforylované proteiny. RGS proteiny mají jednak funkci proteinů aktivujících GTPasovou aktivitu G proteinů a dále regulují interakce mezi G proteiny a jejich efektory. RGS3 protein je jedním z RGS proteinů u kterých bylo zjištěno, že jsou vazebnými partnery 14-3-3 proteinů. Zdá se, že 14-3-3 proteiny fungují jako inhibitory RGS proteinů – redukují jejich schopnost aktivovat GTPasovou aktivitu G proteinů. Molekulární mechanismus funkce 14-3-3 proteinu v procesu regulace RGS3 proteinu je neznámý. Proto navrhujeme (1) provést biofyzikální charakterizaci 14-3-3/RGS3 komplexu; (2) studovat jakým způsobem 14-3-3 protein inhibuje interakci mezi RGS3 proteinem a Galfa podjednotkou G proteinu pomocí fluorescenční spektroskopie; (3) provést strukturní analýzu komplexu 14-3-3 protein/RGS3 protein pomocí proteinové rentgenové krystalografie. (cs)
The main goal of this project is to understand the structural basis of 14-3-3 protein–dependent regulation of function of RGS3 protein. 14-3-3 proteins are regulatory molecules that bind to other proteins in a phosphorylation dependent manner. RGS proteins function both as GTPase activating proteins for G proteins and regulators of G protein-effector interactions. RGS3 protein is one of the RGS proteins known to be 14-3-3 binding partners. The role of 14-3-3 protein in the regulation of RGS3 seems to be an inhibition of its GTPase activating function on G protein mediated signals. However structural details concerning interaction between 14-3-3 and RGS3 are unknown. We propose to perform (1) biophysical characterization of 14-3-3/RGS3 complex; (2) to study how 14-3-3 protein inhibits the interaction between RGS3 protein and Galpha subunit of G protein using fluorescence spectroscopy; (3) to perform structural analysis of the 14-3-3/RGS3 complex using protein X-ray crystallography. (en)