Znalosti role cysteinových zbytků ve vztahu mezi strukturou a funkcí beta-glukozidázy jsou omezené. Klonovali jsme cDNA, Zm-p60.l, která kóduje novou kukuřičnou beta-glukozidázu. Beta-Glukozidáza Zm-p60.l uvolňuje aktivní cytokininy z jejich neaktivních glukozidů in vitro. Její funkce in vivo může spočívat v zásobování vyvíjejícího se embrya kukuřice aktivními cytokininy. Aminokyselinová sekvence Zm-p60.l obsahuje pět cysteinových zbytků. Navrhujeme zaměnit cysteinové zbytky jinými aminokyselinami metodou místně cílené mutageneze. Analýza změn v katalytických a strukturních vlastnostech enzymu umožní vyvodit závěry o významu jednotlivých cysteinových zbytků pro aktivitu a architekturu enzymu. U mutant se ztracenou enzymatickou aktivitou budeme vyhledávat, metodou náhodné mutageneze, mutace v jiných místech molekuly, které povedou k obnovení enzymatické aktivity. Takto získáme nové poznatky o plasticitě molekuly enzymu. (cs)
Knowledge of the role of cysteine residues in structure-function relationships in beta-glucosidases is limited. We have cloned a cDNA, Zm-p60.l, coding for a novel maize beta-glucosidase. The Zm-p60.l beta-glucosidase releases free cytokinins from their inactive glucosides in vitro and may function in vivo to supply the developing maize embryo with active cytokinins. The Zm-p60.l amino acid suquence contains five cysteine residues. Here we propose to use site-directed mutagenesis to replace cysteine residues by specific amino acids. Analysis of changed catalytic and structural properties of the enzyme will allow us to make conclusions on the role of individual cysteine residues in activity and architecture of the enzyme. In mutants which lose activity we will search, by random mutagenesis, for second-site mutations restoring the enzyme activity. Thereby we will gain a novel information on plasticity of the enzyme molecule. (en)