V předchozí práci jsme v buněčném jádře prokázali přítomnost nové formy myosinu Ic a zjistili, že jaderný myosin je zapojen do transkripce DNA a má tedy zásadní význam v genové expresi. Myosin je molekulovým motorem, který interaguje s aktinovýmifilamenty. Navrhovaný projekt proto předpokládá určení funkcí jaderného aktinu a má dva hlavní cíle: 1) charakterizace dynamiky a strukturálních vlastností jaderného aktinu a 2) studium funkce aktinu v transkripci. Charakterizace jaderných aktinovýchstruktur zahrnuje také popis jaderných proteinů vážících se k aktinu (jejich funkce jsou dobře známy z cytoplazmy). Plánované metody zahrnují imunocytochemickou ultrastrukturální detekci, analýzu obrazu a stereologickou identifikaci kolokalizace,mikroinjekce do živých buňek, značení transkripčních míst, imunoprecipitace a in vitro transkripční eseje. (cs)
We have demonstrated previously the presence of a 120-kDa isoform of myosin Ic in the nucleus and showed that this protein is involved in DNA transcription. Myosin 1 is a molecular motor protein that needs actin filaments for its function. We now wish toinvestigate functions of nuclear actin in more detail. There are two main goals in this project: 1) characterization of the dynamics and structural properties of nuclear actin and 2) investigation of actin function in DNA transcription. Intranuclearlocalization and association of various actin-binding proteins to actin will be investigated as part of the first aim. Methods of research include immunoelectron microscopy, image processing and stereological identification of colocalization patterns;microinjections into living cells, labelling of transcription sites, immunoprecipitations and in vitro transcription assays. (en)