We propose a new method for the idetification of unknown interactions between a variety of proteins and ligands. The principe of the method is based on the interaction of mixtures of immobilized ligands (arrays of affinity carriers) with a mixture proteins occuring in crude homogenates from mammalian tissues. We intend to prepare combinatorial libraries of immobilized phosphinic pseudopeptides which will be used for the affinity binding of specific proteins. The bound proteins will be eluted and analyzed. The subsequent iterative process (the chemical synthesis of sublibraries) should lead to the identification of the unique ligand for the selected protein. Ideally, This ligand will be a potent and selective modulator of the respective protein function. No previous information about the nature of the protein is needed for the identification of the protein-ligand interaction. This procedure should be also a tool for the isolation of previously unknown proteins. (en)
Navrhujeme novou metodu pro identifikaci nových doposud neznámých interakcí mezi různorodými proteiny a ligandy. Princip metody je založen na interakci směsí imobilizovaných ligandů (řady afinitních nosičů) se směsmi proteinů přítomných v surových homogenátech ze savčích tkání. Zamýšlíme připravit kombinatorické knihovny imobilizovaných fosfinových pseudopeptidů, které budou použity pro afinitní vázání specifických proteinů. Navázané proteiny budou eluovány a analyzovány. Následovný iterativní proces (chemická syntéza podknihoven) by měl vést k identifikaci jedinečného ligandu pro vybraný protein. Tento ligand by měl být, v ideálním případě, potentním a selektivním modulátorem funkce daného proteinu. Pro identifikaci interakce protein-ligand tak není potřebná žádná předchozí informace o charakteru daného proteinu. Tato metoda může být rovněž nástrojem pro isolaci proteinu nového, doposud neznámého.
Podařilo se vyvinout novou metodu založenou na principu afinitní chromatografie sloužící k vyhledávání specifických proteinů pro ligandy připravené ve formě kombinatorických knihoven. Byly připraveny vysoce selektivní inhibitory lidského enzymu BHMT. (cs)