Proposed project is based on the discovery of an unusually small and fairly active Kazal-type proteinase inhibitor GmSP12 that occurs in the silk of a pyralid moth Galleria mellonella. It is planed to prepare several modifications of this inhibitor in a yeast expression system Pichia pastoris. Some versions of rGmSP12 will be extended at the C-terminus with the myc epitope and poly(His) tag. Major attention will be paid to the preparation of recombinant orthologs differing in the amino acid residue in the P1 position. The goal is to identify inhibitors that are easy to prepare, are well soluble, and act selectively on the proteinases of bacteria and fungi and/or on the elastate. (en)
Předkládaný projekt je založen na objevu našeho pracoviště, který se týká neobvyklého malého a velmi aktivního inhibitoru proteáz GmSP12, který byl zjištěn v hedvábí zavíječe voskového Galleria mellonella. Projekt zahrnuje přípravu několika modifikací tohoto inhibitoru v kvasinkovém expresním systému Pichia pastoris s tím, že některé verze rGmSP12 budou na prodlouženém C-koncem molekuly obsahovat epitop myc a poly(His) konec. Hlavní pozornost však bude soustředěna na přípravu rekombinantních inhibitorů lišících se aminokyselinou v kritickém místě P1. Cílem projektu je vytvořit inhibitory, které se snadno připravují a které jsou dobře rozpustné a působí selektivně na proteázy bakterií a hub a také proti elastáze. (cs)