Budou testovány nové teorie, jak je na chemické synapsi regulován rozptyl synaptických zpoždění a jaká je účast Ca-intracelulárních pufrů. To umožní pochopit uvolňování acetylcholinu z měchýřku TRP kanály a zjistit, které proteiny jsou fosforylovány kaskádou Ca-proteinkinázy A, kterou jsme nedávno popsali při synchronizaci výlevu. Bude ověřena nová hypotéza o tom, že nekvantový výlev Ach je uskutečňován přechodným Mg-blokovatelným komplexním pórem, tvořeným transportérem pro Ach a transportérem cholinu. Oba proteiny byly nedávno nalezeny v membráně synaptických měchýřků a mohou být zabudovány do presynaptické membrány společně. Na transfekovaných buňkách bude sledována aktivace a desensitizace nikotinového Ach receptoru různého složení s mutovanými F a C podjednotkovými smyčkami a tato místa budou studována jako potenciální sensory pro Ca2+ při desensitizaci. Použijeme dostupný terčíkový zámek, konfokální a fluorescenční mikroskopy, tkáňové kultury a molekulárně biologické postupy. (cs)
New theories will be tested on how the dispersion of quantal synaptic delays is regulated by Ca, and how Ca intracellular buffers and Ca-calmodulin complexes are involved. This might determine how the TRP channel regulates the release of Ach from the intravesicular matrix and what kind of proteins are phosphorylated via the Ca-dependent protein kinase A cascade that we discovered determines the synchronization of quantal release. A theory emerged that the nonquantal Ach release is mediated by a pore-like complex of vesicle-associated Ach-transporter (VAChT) and choline transporter. Both proteins were found recently in one sub-population of synaptic vesicles. Activation and desensitization of the nAch receptor by selected sites on the F and C subunit loops will be tested in muscle and neural nAChR types. as potential sensors of Ca2+ during desensitization. Patch clamp setups, confocal and fluorescence microscopes and tissue culture and molecular biology facilities are available. (en)