Replikace eukaryotické DNA zabezpečuje přesnou a efektivní duplikaci genomu. Ačkoli je v současnosti k dispozici mnoho poznatků o DNA replikaci, celá řada otázek týkající se replikace není ještě dobře zodpovězena. V našem projektu se chceme zabývat organizací a utvářením replikačních domén (RDs). Tyto elektron-mikrosopické (EM) entity byly již dříve popsány u HeLa buněk. V tomto ohledu chceme zjistit, zda replikace prostřednictvím RDs představuje společný rys replikace savčího genomu. Mimoto chceme popsat 3D organizaci replikačních míst pomocí EM tomografie. Současně chceme testovat hypotézu, že RDs představují spíše skupinu replikonů než jednotlivé replikony. Následně plánujeme analyzovat časové rozdíly ve vytváření časně a pozdně replikovaných RDs. Posledním cílem je analýza formování pre-iniciačního komplexu u časně a pozdně replikovaných počátků s ohledem na Cdc45 protein a analýza jeho role v elongačním kroku DNA replikace. (cs)
Eucaryotic DNA replication ensures accurate and efficient genome duplication. Although a lot of findings about DNA replication is known, many questions about this process need to be solved. In our project, we would like to deal with organization and formation of replication domains (RDs). These EM entities were earlier described in HeLa cells. In this respect, we want to test whether replication via RDs presents common feature of replication of mammalian genome. The high resolution 3D organization of RDs will be addressed by EM tomography approach. The hypothesis that RDs represent rather replicon clusters than individual replicons will be also tested. Next, differences in timing of reconstitution of early and late RDs will be tested. Finally, formation of pre-initiation complex at early and late replicating origins will be addressed with respect to the protein Cdc45 and its role in elongation step of DNA replication will be examined. (en)