It is proposed to investigate the transduction of signals by muscarinic receptors for acetylcholine with the aim to contribute to deeper understanding of the following questions: (1) How selective are muscarinic receptors (in particular, the M2 receptor subtype) with regard to basic types of G proteins? (2) Is their G protein selectivity influenced by the properties of the agonist inducing their activation? (3) What are the location and detailed structure of the sites for the binding of allosteric modulators to muscarinic receptors? Experiments will be mainly performed on genetically modified cells expressing the M2 muscarinic receptors and the basic types of G proteins at different stoichiometric ratios, on cells expressing mutated muscarinic receptors, and on reconstituted membranes containing purified receptors and G proteins. The results will be important for understanding the physiology of cholinergic synapses and for discovering new ways to modify cholinergic neurotransmission by (en)
Projekt je věnován problémům transdukce signálů muskarinovými receptory pro acetylcholin a jeho hlavním cílem je prohloubit znalosti o těchto otázkách: (1) Jak vysokou selektivitu mají muskarinové receptory (zvláště jejich podtyp M2) vůči základním kategoriím G proteinů? (2) Působí na jejich selektivitu vůči G proteinům povaha agonisty, kterým jsou aktivovány? (3) Jaká je lokalizace a detailní struktura vazebných oblastí pro asociaci alosterických modulátorů muskarinových receptorů? Pokusy se budouprovádět hlavně na geneticky modifikovaných buňkách exprimujících muskarinové receptory podtypu M2 a základní typy G proteinů v různém stechiometrickém poměru, na buňkách exprimujících mutované muskarinové receptory a na rekonstituovaných membránách obsahujících očištěné receptory a G proteiny. Výsledky budou důležité pro fyziologii cholinergních synapsí a přispějí při hledání nových cest, jak chemicky modifikovat cholinergní synaptický přenos. Většina práce na projektu bude probíhat na oddělení
Zabývali jsme se analýzou vazebných vlastností a funkčního spřažení muskarinových receptorů s netypickými signálními drahami. Zjistili jsme, že třetí extracelulární klička má zásadní vliv na kooperativitu alosterických modulátorů podobných strychninu s (cs)
Binding characteristics of muscarinic receptors and their coupling with uncommon signalling pathways were studied. We found that the third extracellular loop plays prime role in cooperativity with strychnine-like allosteric modulators with labelled antag (en)