Molecular genetic methods based on polymerase chain reaction (PCR) represent an indispensable tool in laboratories of basic and applied research. The proposed project deals with an introduction and application of reverse trascription PCR (RT-PCR) and molecular hybridization for the detection of potato viruses. These methods should become the more sensitive alternative to the currently used ELISA testinng. In the RT-PCR approach, the presence of virus is detected as a specific DNA fragment on agarosegel separated by electrophoresis of a reaction mixture. Besides, this reaction product will be labeled and used as a probe to detect viral RNA quantitatively on dot-blots of total RNA samples. Both approaches (RT-PCR and molecular hybridization) will be used for testing large sets of samples. After its introduction, the RT-PCR can be used not only for the detection of potato viruses (the focus of this project) but also for other viral, bacterial or fungal diseases of economically important plants (en)
Molekulárně genetické metody založené na polymerázové řetězové reakci (PCR) představují v současné době nepostradatelný nástroj laboratoří základního i aplikovaného výzkumu.Tyto metody jsou citlivější alternativou k dosud používané ELISA technice. Přítomnost viru se detekuje jako specifický RT-PCR produkt (DNA fragment) po elektroforetické separaci reakční směsi. Tento produkt lze kromě toho dále po označení použit jako sonda pro hybridizaci RNA dot-blotů ke kvantitativnímu stanovení hladiny virové RNA.Oba přístupy (RT-PCR, molekulární hybridizace) jsou proveditelné i v rozsáhlých souborech vzorků. Použití RT-PCR a molekulárně hybridizačních technik je v další perspektivě možno rozšířit z detekce virů bramboru, na které je tento projekt zaměřen, i na jiná virová a bakteriální onemocnění hospodářsky významných plodin. Předkládaný projekt se zabývá zavedením a aplikací polymerázové řetězové reakce s reverzní transkripcí (RT-PCR) a RNA-DNA molekulární hybridizace pro detekci virů bramboru. Po na
Byla zavedena extrémně citlivá metoda diagnózy virů(RT- PCR, RNA-DNA hybridizace) umožňující spolehlivé testování zemědělských produktů pro karanténní účely, v souladu se směrnicemi EU. (cs)