The main objective of the present project is to map the envelope glycoprotein gp 135 (SU) of the Maedi-Visna virus in terms of the presence of conserved and variable regions, and possibly it's spatial arrangement. We plan to express gp 135 as several bacterial fusion proteins. Each protein will be used as a coat in ELISA test and will be tested for reactivity with Maedi-Visna positive ovine sera. This reactivity will indicate the degree of variability of a given protein fragment. In order to localise neutralising epitopes, rabbits will be immunised with aforementioned fusion proteins. Resulting immune sera will be tested for neutralising properties in neutralisation tests on tissue culture system. Mapping the epitopes of the envelope glycoprotein of the Maedi-Visna virus will give information on this important viral structural and functional component of lentiviruses. Important will be in particular the determination of the correlation between the computer-prognosed structure of gp 135 based on compa (en)
Cílem projektu je mapování konzervovaných a varibilních epitotypů viru Maedi-Visna. Gen env kódující tento glykoprotein bude nejprve sekvetován a poté exprimován jako několik parciálních rekombinantních proteinů v E. Coli. Každý z těchto proteinů bude použit jako antigen v sérologické reakci a bude zjišťována jeho reaktivita s větším množství ovčích, Madei - Visna pozitivních sér. Reaktivita těchto sér bude nepřímo úměrná stupni variability daného proteinového fragmentu. Tyto fragmenty budou dále použity k imunizaci králíků a získaná antiepitopová séra budou testována v neutralizačním testu na buněčných kulturách. Tímto způsobem budeme schopni přesně lokalizovat neutralizační doménu viru. Stejná antisera použijeme v testech imunodifuze, imunoprecipitace a imunoblotu k částečnému stanovení konformačních epitopů a terciálnní struktury. Mapování epytopů povrchového glykoproteinu Maedi-Visna rozšíří znalosti o této nesmírně významné virové strukturální i funkční komponentě lentivirů. Přínosné bude zejmén (cs)