Purine bodies are synthesized de novo in ten step enzymatic pathway. Only two inherited metabolic defects have been identified. The reason is that current diagnostic techniques are not able to identify patients that might harbour the diseases. The aims of our work are to develop methods capable to follow human intracellular purine de novo synthesis and to identify its defects at the metabolite level. We will use stable isotope and radioactive incorporation methods in conjunction with microscale separation technologies, MS techniques and 500 MHz NMR for the purpose. Using the methods we will study metabolic consequences of the defects on model cell lines - Chinese hamster cells and Saccharomyces cerevisiae strains - aberrant in purine de novo synthesis. (en)
Puriny jsou syntetizovány de novo v desetistupňové metabolické dráze. Doposud jsou popsány pouze dva defekty. Cílem tohoto projektu je vyvinout metody schopné sledovat lidskou de novo syntézu a identifikovat tyto defekty na metabolitové úrovni. Budou použity metody inkorporace stabilních a radioaktivních izotopů ve spojení s mikroškálovými separačními technikami, pokročilými technikami hmotové spektrometrie a 500 MHz NMR. Těmito metodami budeme studovat metabolitové důsledky těchto defektů na modelových buňkách čínského křečka a Saccharomyces cerevisiae defektních v purinové de novo syntéze. Následně budou metody aplikovány na tělní tekutiny a buňky pacientů, kteří mohou být těmito defekty postiženi.
Připraveny nové analytické metody pomocí kapilární elektroforezy a kapalinové chromatografie pro stanovení intermediátů druhé části purinové %22de novo%22 syntézy v buňkách a biologických tekutinách. (cs)
New methods using capillary electrophoresis and liquid chromatography were prepared for analyzes of intermediates of the second de novo purine synthesis in the biologic fluids. (en)